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非洲豬瘟病毒檢測是非洲豬瘟防控工作的重要舉措，意義重大。為進(jìn)一步提高非洲豬瘟病毒檢測結(jié)果準(zhǔn)確性，規(guī)范非洲豬瘟病毒診斷制品生產(chǎn)、經(jīng)營和使用行為，天合非洲豬瘟PCR檢測儀TH-P1600(實(shí)時熒光定量PCR儀)????????PCR???用于運(yùn)行病毒檢測實(shí)驗，并對實(shí)驗數(shù)據(jù)進(jìn)行分析;儀器既可在實(shí)驗室內(nèi)操作，又可用于野外科學(xué)實(shí)驗，配合相應(yīng)試劑，對取自待檢測樣本的分析物或其他分析物中的目標(biāo)核酸進(jìn)行快速、準(zhǔn)確的定性檢測。

非洲豬瘟PCR儀病毒DNA提取方式：

1、DNA提取應(yīng)在樣本制備區(qū)內(nèi)采用以下方法進(jìn)行，若使用其他等效的病毒DNA提取試劑，則按照試劑說明書操作。

2、待檢樣品、陽性對照和陰性對照的份數(shù)總和用n表示，取n個滅菌1.5l離心管，逐管編號。

3、每管加入200uLDNA提取液1，然后分別加入待測樣品、陰性對照和陽性對照各200uL，1份樣品換用1個吸頭，混勻器上震蕩混勻5s。于4℃~25℃條件下，13000r/min離心10min。

4、盡可能吸取上清、棄去，吸頭不要碰到沉淀，再加入10uLDNA提取液2，混勻器上震蕩混勻5s。于4℃~25℃條件下，2000r/min離心10s。

5、100℃干浴或沸水浴10min。

6、加入90uL無DNA酶的滅菌去離子水，13000r/min離心10min，上清即為提取的DNA，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

非洲豬瘟PCR儀操作步驟：

1、在反應(yīng)混合物配制區(qū)、樣品制備區(qū)和檢測區(qū)分別進(jìn)行提取。

2、每個檢測反應(yīng)體系需使用20uL實(shí)時熒光PCR反應(yīng)液。充分混勻后分裝，每個PCR反應(yīng)管20uL。轉(zhuǎn)移PCR反應(yīng)管至樣品制備區(qū)。

3、反應(yīng)管中分別加入提取的DNA溶液5L，使每管總體積達(dá)到25L，記錄反應(yīng)管對應(yīng)的樣品編號。蓋緊管蓋后，瞬時離心。

4、將加樣后的反應(yīng)管放入實(shí)時熒光PCR檢測儀內(nèi)，記錄反應(yīng)管擺放順序。